Plásmido Doble Nickase (h) BSEP: sc-400742-NIC

ABCB11 codifica la bomba exportadora de sales biliares (BSEP), un transportador canalicular de la familia ABC (ATP-binding cassette) que impulsa, de manera dependiente de ATP, el eflujo de ácidos biliares desde los hepatocitos hacia la bilis. La actividad de BSEP es fundamental para la circulación enterohepática y la homeostasis hepática de los ácidos biliares, coordinándose con la síntesis, la conjugación y vías de señalización como el control por retroalimentación regulado por FXR. La alteración de la función de ABCB11 cambia la composición de los ácidos biliares y su acumulación intracelular, perturbando la integridad de la membrana, las respuestas al estrés oxidativo y la señalización inflamatoria en el sistema hepatobiliar. La variación genética o la disminución de la expresión de ABCB11 se asocia con fenotipos colestásicos y ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar la biología de los transportadores y la patología hepática impulsada por los ácidos biliares.

BSEP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ABCB11 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ABCB11. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ABCB11. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ABCB11 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.