Plásmido CRISPR de Activación (h) Brn-2/BRN2/POU3F2: sc-400392-ACT

POU3F2 (BRN2/Brn-2) es un factor de transcripción con dominio homeobox tipo POU que se une a motivos octámero para controlar programas génicos que gobiernan el compromiso hacia linajes neuronales, la diferenciación neuronal y el mantenimiento de la identidad celular. En el sistema nervioso en desarrollo y en el adulto, BRN2 coordina redes transcripcionales con otros reguladores neurogénicos para modular el estado de la cromatina y promover la expresión específica del contexto de marcadores neuronales. La actividad desregulada de POU3F2 se ha vinculado con estados de diferenciación alterados y plasticidad de linaje en cáncer y con fenotipos del neurodesarrollo, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar el control transcripcional del destino celular. Sus efectos aguas abajo se intersectan con vías implicadas en la “stemness”, la migración y la reprogramación transcripcional adaptativa al estrés.

Brn-2/BRN2/POU3F2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de POU3F2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Brn-2/BRN2/POU3F2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus POU3F2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional POU3F2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Brn-2/BRN2/POU3F2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo POU3F2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Brn-2/BRN2/POU3F2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Brn-2/BRN2/POU3F2 en células tumorales con expresión de POU3F2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.