Plasmide Double Nickase (m) Brm: sc-426415-NIC

Le gène murin **Smarca2** code **Brm (SMARCA2)**, une sous-unité hélicase ATP‑dépendante du complexe de remodelage de la chromatine **SWI/SNF (BAF)**, qui repositionne les nucléosomes afin de réguler les programmes transcriptionnels. Brm contribue à coordonner l’accessibilité des enhancers et des promoteurs dans des voies contrôlant la progression du cycle cellulaire, la spécification de lignée, les réponses aux dommages de l’ADN et la différenciation. Une activité SWI/SNF altérée, notamment la perturbation de la fonction de **SMARCA2/BRM** ou de la composition du complexe, est associée à une dérégulation épigénétique observée dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, tels que la biologie du cancer et les processus neurodéveloppementaux. Smarca2 est donc largement étudié pour son rôle dans l’architecture de la chromatine, la coopérativité des facteurs de transcription et la stabilité du génome dans les cellules de mammifères.

Brm Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Smarca2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Smarca2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Smarca2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Smarca2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.