BRCA1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400093-LAC

BRCA1 codifica o supressor tumoral humano BRCA1, uma proteína nuclear multifuncional essencial para a manutenção da integridade do genoma. O BRCA1 coordena o reparo de quebras de dupla fita do DNA por recombinação homóloga, contribui para a sinalização de checkpoints e interage com respostas ao estresse replicativo e com o remodelamento da cromatina por meio de complexos proteicos como BRCA1–BARD1. Por meio de atividade de ligase de ubiquitina e da regulação da transcrição e da dinâmica de focos de dano ao DNA, o BRCA1 ajuda a controlar a progressão do ciclo celular e preserva a estabilidade cromossômica. A disrupção ou desregulação de BRCA1 está fortemente associada à capacidade reduzida de reparo do DNA e ao aumento da instabilidade genômica, tornando-o um nó central em vias de resposta ao dano no DNA relevantes para a pesquisa em biologia do câncer.

As Partículas de Ativação Lentivirais BRCA1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de BRCA1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais BRCA1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição BRCA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de BRCA1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo BRCA1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.