BMP-9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402887-ACT

GDF2 kodiert das Knochenmorphogenetische Protein 9 (BMP‑9), einen sezernierten Liganden der TGF‑β‑Superfamilie, der vorwiegend über Typ‑I‑Rezeptoren wie ALK1 sowie Typ‑II‑Rezeptoren einschließlich BMPR2 signalisiert, um eine SMAD1/5/9‑abhängige Transkription zu aktivieren. In menschlichen Zellen trägt BMP‑9 zur Regulation der Endothel‑Quieszenz, des vaskulären Remodelings und des angiogenen Gleichgewichts bei und beeinflusst zudem kontextabhängig osteogene und metabolische Genprogramme. Die Aktivität des BMP‑9‑Signalwegs überschneidet sich mit BMP/TGF‑β‑Crosstalk, der Regulation der extrazellulären Matrix und inflammatorischer Signalgebung und prägt so Zellschicksalsentscheidungen in vaskulären, hepatischen und mesenchymalen Kompartimenten. Eine fehlregulierte BMP‑9/GDF2‑Signalgebung wurde in der Literatur mit vaskulärer Pathobiologie in Verbindung gebracht, einschließlich erblicher und erworbener Störungen der Endothelfunktion und des Remodelings, was ihre Relevanz als Forschungsziel in der kardiovaskulären und Entwicklungsbiologie unterstreicht.

BMP-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GDF2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BMP-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GDF2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GDF2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BMP-9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GDF2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BMP-9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BMP-9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GDF2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.