Plasmide CRISPR/Cas9 KO BMP-8A (h): sc-406589

Présentation

BMP8A code la protéine morphogénétique osseuse 8A (BMP‑8A), un ligand sécrété de la superfamille du TGF‑β qui transmet des signaux via les récepteurs BMP afin d’activer des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD1/5/9. BMP‑8A contribue à la régulation de la mise en place des patrons de développement, de la différenciation et du remodelage tissulaires, et peut influencer des processus cellulaires tels que la prolifération, l’engagement de lignée et la dynamique de la matrice extracellulaire. Dans le cadre plus large du réseau de signalisation BMP, BMP8A interagit avec des voies qui gouvernent la morphogenèse et l’organogenèse et peut moduler des interactions avec la voie MAPK et d’autres cascades de signalisation spécifiques du contexte. Une activité dérégulée de la voie BMP, notamment une disponibilité altérée des ligands, est associée à des phénotypes développementaux anormaux et a été étudiée dans des contextes pertinents pour des maladies impliquant la fibrose, la biologie du squelette et la signalisation du microenvironnement tumoral.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BMP-8A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BMP8A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BMP8A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BMP8A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BMP-8A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BMP8A pour l'étude de la signalisation de BMP-8A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BMP8A essentiels à la fonction de BMP-8A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BMP8A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BMP-8A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BMP-8A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BMP8A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BMP-8A plasmide HDR (h) et le BMP-8A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BMP8A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BMP8A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.