Plásmido CRISPR de Activación (h) Bmi-1: sc-417606-ACT

BMI1 codifica la proteína Bmi-1 del grupo Polycomb, un componente central del complejo represor Polycomb 1 (PRC1) que mantiene el silenciamiento génico epigenético mediante la compactación de la cromatina y la ubiquitinación de H2A. Bmi-1 regula programas transcripcionales que controlan la autorrenovación, el compromiso de linaje y la progresión del ciclo celular, incluida la represión del locus CDKN2A/INK4A–ARF y la modulación de los puntos de control de la senescencia. A través de estas funciones, BMI1 influye en las respuestas al daño del ADN, la tolerancia al estrés oxidativo y los fenotipos tipo célula madre en diversos contextos celulares. La actividad desregulada de BMI1 se ha asociado ampliamente con estados transcripcionales oncogénicos y una diferenciación alterada en múltiples modelos relevantes para enfermedades, lo que lo convierte en un objetivo frecuente en la investigación en epigenética y biología del cáncer.

Bmi-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BMI1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Bmi-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BMI1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BMI1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Bmi-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BMI1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Bmi-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Bmi-1 en células tumorales con expresión de BMI1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.