BLOS2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406776

Descripción general

BLOC1S2 codifica BLOS2, una subunidad central del complejo 1 de biogénesis de orgánulos relacionados con lisosomas (BLOC-1), que coordina el tráfico endosomal y la clasificación de carga. Mediante las interacciones de BLOC-1 con complejos de proteínas adaptadoras y con la maquinaria de transporte del citoesqueleto, BLOS2 contribuye a la entrega de proteínas de membrana a endosomas, lisosomas y orgánulos relacionados con lisosomas, influyendo en la maduración de las vesículas y la homeostasis celular. La alteración de componentes de BLOC-1 se ha relacionado con cambios en el crecimiento de neuritas, la dinámica de las vesículas sinápticas y defectos en vías de pigmentación que dependen de orgánulos especializados como los melanosomas. En consecuencia, BLOC1S2 se estudia en el contexto de trastornos del transporte intracelular y en neurobiología, donde la perturbación de la vía endolisosomal puede afectar la señalización y la proteostasis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO BLOS2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BLOC1S2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BLOC1S2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BLOC1S2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BLOS2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BLOC1S2 para la investigación de la señalización de BLOS2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de BLOC1S2 críticos para la función de BLOS2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BLOC1S2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido BLOS2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido BLOS2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BLOC1S2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BLOS2 (h) y el plásmido HDR BLOS2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BLOC1S2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BLOC1S2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.