Plasmide Double Nickase (h) BF-1: sc-402933-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BF-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BF-1 Double Nickase (h) et le plasmide BF-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FOXG1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BF-1 Antibody (D-12): sc-518188
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BF-1 | sc-402933-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BF-1 | sc-402933-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOXG1 code le facteur de transcription de la famille forkhead box BF-1, un régulateur clé de la mise en place du télencéphale, de la prolifération des progéniteurs neuronaux et du calendrier de différenciation au cours du développement du cerveau humain. BF-1 façonne des programmes d’expression génique qui influencent la neurogenèse et l’identité régionale via la répression/activation transcriptionnelle, avec des effets en aval sur le contrôle du cycle cellulaire et les voies de spécification des lignages. Une altération du dosage ou de la fonction de FOXG1 est fortement associée à des phénotypes neurodéveloppementaux, notamment le syndrome FOXG1 ainsi que des tableaux plus larges relevant des troubles du spectre de l’autisme et des encéphalopathies épileptiques. Dans des modèles cellulaires, la perturbation de FOXG1 est utilisée pour étudier la compétence des progéniteurs corticaux, la maturation neuronale et des phénotypes d’activité des réseaux pertinents pour les troubles du développement.
BF-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FOXG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FOXG1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FOXG1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FOXG1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.