Plasmide Double Nickase (m) beta-catenin: sc-419477-NIC

Le gène murin **Ctnnb1** code la **β-caténine**, une protéine multifonctionnelle à répétitions armadillo qui relie les jonctions d’adhérence dépendantes des cadherines au cytosquelette d’actine et régule l’adhésion cellule–cellule ainsi que l’architecture tissulaire. Dans la voie Wnt canonique, la β-caténine stabilisée s’accumule dans le cytoplasme puis transloque vers le noyau, où elle s’associe aux facteurs de transcription TCF/LEF pour coordonner des programmes contrôlant la prolifération, la différenciation et le maintien des cellules souches. L’activité de la β-caténine est modulée par le complexe de destruction (notamment APC, AXIN et GSK3), qui intègre des signaux issus d’indices développementaux et de voies sensibles au stress. La dérégulation de la signalisation de la β-caténine ou de ses fonctions d’adhérence est impliquée dans la transformation oncogénique, des anomalies du développement et des pathologies inflammatoires, faisant de **Ctnnb1** un nœud central pour les études mécanistiques.

beta-catenin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ctnnb1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ctnnb1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ctnnb1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ctnnb1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.