Plasmide Double Nickase (h) beta-catenin: sc-400038-NIC

CTNNB1 code la bêta‑caténine humaine, une protéine multifonctionnelle qui relie les jonctions d’adhérence dépendantes des cadhérines au cytosquelette d’actine et agit comme co‑régulateur transcriptionnel dans la voie canonique Wnt. En l’absence de ligands Wnt, la bêta‑caténine est phosphorylée par le complexe de destruction APC–AXIN–GSK3 et ciblée pour une dégradation protéasomale, tandis que l’activation de la voie stabilise la bêta‑caténine et favorise, dans le noyau, la co‑activation de programmes géniques dépendants de TCF/LEF contrôlant la prolifération, la différenciation et le maintien des cellules souches. Une activité aberrante ou une stabilisation de CTNNB1 perturbe les décisions de destin cellulaire, l’intégrité épithéliale et l’organisation du développement, et est fréquemment impliquée dans la signalisation oncogénique et des dysplasies spécifiques de certains tissus. En tant qu’effecteur nodal intégrant l’adhérence cellulaire et les sorties de la voie Wnt, CTNNB1 est largement étudié dans des contextes tels que la TEM (transition épithélio‑mésenchymateuse), l’inhibition de contact, la biologie des organoïdes et les interconnexions de voies avec Hippo et la signalisation des facteurs de croissance.

beta-catenin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CTNNB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CTNNB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CTNNB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CTNNB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.