Plasmide Double Nickase (h) beta Arrestin 1: sc-400642-NIC

ARRB1 code la bêta-arrestine 1, un adaptateur multifonctionnel qui se lie aux RCPG activés afin de médiariser la désensibilisation, l’internalisation et le trafic des récepteurs. Au-delà de la régulation canonique des RCPG, la bêta-arrestine 1 sert de plateforme d’assemblage à des modules de signalisation incluant MAPK/ERK, des kinases de la famille SRC et des composants de la machinerie endocytique, modulant l’amplitude et la durée du signal. Elle influence également des programmes transcriptionnels via des interactions reliant des récepteurs proches de la membrane à des réponses nucléaires, avec des effets en aval sur la prolifération, la migration et la signalisation inflammatoire. Une signalisation dépendante d’ARRB1 dérégulée a été impliquée dans des contextes tels que la biologie du cancer, les réponses au stress cardiométabolique et des processus immuno-médiés, ce qui en fait un nœud utile pour l’analyse des voies de signalisation.

beta Arrestin 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARRB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARRB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARRB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARRB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.