beta Actin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418965

Übersicht

Actb kodiert das murine Beta-Actin, ein hochkonserviertes Zytoskelettprotein, das zu Mikrofilamenten polymerisiert und so Zellform, Polarität und mechanische Stabilität unterstützt. Die Dynamik von Beta-Actin treibt zentrale Prozesse wie die Zytokinese, den vesikulären Transport und die Zellmigration an – durch eine koordinierte Regulation von Actin-Nukleation, -Verzweigung und -Umsatz in Signalwegen, an denen Rho-Familien-GTPasen und Actin-bindende Proteine beteiligt sind. Über seine strukturellen Funktionen hinaus beeinflusst der Umbau des Actin-Zytoskeletts Transkriptionsprogramme und Signaltransduktion, indem er die Mechanotransduktion und nukleäre Actin-Pools moduliert. Eine fehlregulierte Actin-Organisation wird in experimentellen Modellen breit mit Entwicklungsdefekten, beeinträchtigter Wundheilung, veränderter Motilität von Immunzellen und der Invasion von Tumorzellen in Verbindung gebracht, was Actb zu einem wichtigen Referenzlokus in Studien der Zellbiologie und Krankheitsmechanismen macht.

Das beta Actin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Actb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Actb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Actb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die beta Actin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Actb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der beta Actin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Actb-Exone abzielen, die für die beta Actin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Actb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom beta Actin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom beta Actin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Actb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das beta Actin HDR-Plasmid (m) und beta Actin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Actb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Actb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.