beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Double Nickase Plasmid (h): sc-404570-NIC

ATP1B3 kodiert die Beta-3-Untereinheit der Na⁺/K⁺-ATPase, eines P-Typ-ATPase-Komplexes der Plasmamembran, der für die Aufrechterhaltung von Na⁺- und K⁺-Gradienten essenziell ist und damit Membranpotenzial, osmotisches Gleichgewicht und sekundär aktiven Transport unterstützt. Über die Ionenhomöostase hinaus sind Untereinheiten der Na⁺/K⁺-ATPase an Assemblierung und intrazellulärem Transport (Trafficking) der Pumpe beteiligt und können Signalausgänge beeinflussen, die mit Zelladhäsion, Migration und Kontrolle des Zellwachstums verknüpft sind. Die Expression von ATP1B3 und die Pumpenfunktion greifen in Prozesse wie epitheliale Polarität, neuronale Erregbarkeit und Stressantworten ein, unter anderem über eine ionenabhängige Regulation von Transportern und Kinasen. Eine Fehlregulation der Untereinheiten-Zusammensetzung der Na⁺/K⁺-ATPase wurde mit veränderter proliferativer Signalgebung und Gewebedysfunktion in Verbindung gebracht, wodurch ATP1B3 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zu Membrantransport und Signalweg-Crosstalk darstellt.

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP1B3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP1B3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP1B3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP1B3-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.