Plásmido CRISPR de Activación (h) BETA 3: sc-402142-ACT

BHLHE22 (también conocido como BETA 3) codifica un factor de transcripción de tipo hélice‑bucle‑hélice básico (bHLH) implicado en programas de diferenciación y maduración neuronal. Contribuye a redes transcripcionales que determinan la especificación del destino celular, el desarrollo de neuritas y la expresión de genes sinápticos, integrándose con las principales vías de señalización del desarrollo y con el control génico regulado por la cromatina. La regulación alterada de los factores de transcripción bHLH se asocia con fenotipos del neurodesarrollo y con una formación desregulada de circuitos neuronales, lo que convierte a BHLHE22 en un nodo útil para estudiar la represión/activación transcripcional dependiente del contexto. Entre las aplicaciones de investigación más comunes se incluyen el mapeo de dianas aguas abajo, la definición de elementos reguladores específicos de tipo celular y el análisis de redes de regulación génica relevantes para el desarrollo cerebral y los mecanismos de enfermedades neurológicas.

BETA 3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BHLHE22 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BETA 3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BHLHE22 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BHLHE22, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BETA 3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BHLHE22 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BETA 3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BETA 3 en células tumorales con expresión de BHLHE22 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.