Plasmide CRISPR/Cas9 KO BDP1 (m): sc-422508

Présentation

Ptpn18 code une tyrosine phosphatase impliquée dans la régulation de la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase (RTK) et des voies en aval dépendantes de la phosphorylation, qui façonnent la croissance, l’adhérence et la motilité cellulaires. Dans les cellules de souris, PTPN18 a été associée à la modulation de la signalisation de l’EGFR/de la famille ErbB ainsi qu’à des processus de trafic protéique qui influencent la durée du signal et son organisation spatiale. En déphosphorylant des substrats spécifiques, PTPN18 peut affecter les sorties des voies associées à MAPK et PI3K, en intégrant des signaux qui modulent la dynamique du cytosquelette et les réponses cellulaires au stress. Une activité phosphatasique dérégulée et une signalisation RTK altérée sont largement associées à des programmes de signalisation oncogéniques et à des phénotypes inflammatoires, faisant de Ptpn18 une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BDP1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ptpn18 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ptpn18, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ptpn18 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BDP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ptpn18 pour l'étude de la signalisation de BDP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ptpn18 essentiels à la fonction de BDP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ptpn18 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BDP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le BDP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ptpn18. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BDP1 plasmide HDR (m) et le BDP1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ptpn18 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ptpn18 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.