BDNF CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419319-ACT

Das murine Gen **Bdnf** kodiert den brain-derived neurotrophic factor (BDNF), ein sezerniertes Neurotrophin, das an **TRKB/NTRK2** und **p75NTR** bindet und so neuronales Überleben, Differenzierung, synaptische Plastizität sowie aktivitätsabhängiges Umbauen neuronaler Schaltkreise reguliert. Die BDNF-Signalübertragung aktiviert **MAPK/ERK-**, **PI3K–AKT-** und **PLCγ**-Signalwege, um Transkriptionsprogramme, die Dynamik dendritischer Spines und die Neurotransmitterfreisetzung zu modulieren. Im zentralen Nervensystem ist BDNF zentral für Lern- und Gedächtnisprozesse und trägt zur erfahrungsabhängigen Plastizität bei. Veränderte **Bdnf**-Expression oder -Signalgebung wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird breit in Modellen der Neurodegeneration, der Stressreaktivität und der metabolischen Regulation untersucht.

BDNF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Bdnf-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BDNF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Bdnf-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Bdnf-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BDNF-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Bdnf-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BDNF-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BDNF-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Bdnf-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.