Plasmide Double Nickase (h) BBS4: sc-403421-NIC

BBS4 code un composant central du BBSome, un complexe multiprotéique qui assure le trafic des protéines de la membrane ciliaire et soutient l’assemblage ainsi que le maintien du cil primaire. En coordination avec la machinerie de transport intraflagellaire, BBS4 contribue à des voies de signalisation dépendantes des cils, telles que Hedgehog et d’autres cascades médiées par des récepteurs, qui façonnent la polarité cellulaire, la transduction sensorielle et l’organisation du développement. Une altération de la fonction de BBS4 perturbe la ciliogenèse et modifie la dynamique de la signalisation ciliaire, reliant ce gène au syndrome de Bardet–Biedl et à des phénotypes plus larges associés aux ciliopathies. Par conséquent, BBS4 est largement étudié dans le contexte de la biologie du centrosome/corps basal, du transport vésiculaire et des processus métaboliques et neurodéveloppementaux régulés par les cils.

BBS4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BBS4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BBS4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BBS4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BBS4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.