Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (h) BARD1: sc-401212-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)BARD1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BARD1 (h) y el plásmido de doble nickasa BARD1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a BARD1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BARD1 Anticuerpo (E-11): sc-74559
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) BARD1 | sc-401212-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) BARD1 | sc-401212-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BARD1 (dominio RING 1 asociado a BRCA1) es una proteína supresora de tumores que forma un heterodímero obligado con BRCA1 para crear un complejo de ligasa E3 de ubiquitina, central para la estabilidad del genoma. Este complejo coordina la reparación de roturas de doble cadena del ADN, la protección de las horquillas de replicación y la señalización de puntos de control del ciclo celular, vinculando a BARD1 con la recombinación homóloga y con vías más amplias de respuesta al daño del ADN. A través de sus dominios RING y de repeticiones de anquirina, BARD1 ayuda a regular la ubiquitinación de proteínas y el reclutamiento de factores de reparación en los sitios de daño. La desregulación o variantes patogénicas en BARD1 se han asociado con una capacidad de reparación del ADN deteriorada y un aumento de la inestabilidad genómica, lo que respalda su relevancia en estudios de mecanismos de susceptibilidad al cáncer.
BARD1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BARD1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BARD1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BARD1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BARD1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.