Plasmide CRISPR d'Activation (h) band 3: sc-401705-ACT

SLC4A1 code la protéine bande 3 (échangeur d’anions 1, AE1), une protéine membranaire des érythrocytes très abondante qui catalyse un échange électroneutre Cl⁻/HCO₃⁻ afin de soutenir le transport du CO₂, l’équilibre acido-basique systémique et l’homéostasie ionique des globules rouges. Par ses interactions avec le cytosquelette et les enzymes glycolytiques, la bande 3 contribue à la stabilité membranaire, au maintien de la forme cellulaire et à l’organisation de complexes multiprotéiques à la membrane plasmique. Dans les cellules intercalaires du rein, AE1 participe à la gestion du bicarbonate et à la régulation du pH, reliant SLC4A1 à des voies centrales de transport et d’homéostasie. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de SLC4A1 sont associées à des maladies de la membrane des globules rouges et à des défauts des processus d’acidification, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie des érythrocytes et en transport épithélial.

band 3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC4A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

band 3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC4A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC4A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de band 3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC4A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de band 3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie band 3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC4A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.