Plasmide CRISPR d'Activation (h) BAMBI: sc-403701-ACT

BAMBI (inhibiteur membranaire lié de BMP et d’activine) code un pseudorécepteur transmembranaire qui ressemble aux récepteurs de type I de la famille du TGF-β, mais dépourvu du domaine kinase intracellulaire ; il agit ainsi comme un modulateur dépendant du contexte de la signalisation BMP et TGF-β/Activine. En influençant la dynamique de phosphorylation des SMAD et la formation des complexes récepteurs, BAMBI peut ajuster les programmes transcriptionnels en aval qui gouvernent la plasticité épithélio-mésenchymateuse, la différenciation et les réponses inflammatoires. Une expression dérégulée de BAMBI a été associée à une altération du rendement de la voie TGF-β dans des contextes liés à la fibrose et à l’inflammation, et BAMBI est fréquemment étudié dans les travaux sur le microenvironnement tumoral et la signalisation impliquée dans la métastase. En tant que nœud régulateur à la membrane, BAMBI est pertinent pour disséquer les interactions (cross-talk) entre les programmes associés à BMP, Wnt/β-caténine et NF-κB dans des modèles cellulaires humains.

BAMBI Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BAMBI sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BAMBI Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BAMBI dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BAMBI, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BAMBI. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BAMBI natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BAMBI au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BAMBI dans les cellules tumorales présentant une expression de BAMBI silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.