Plasmide CRISPR d'Activation (m) BAI-1: sc-430764-ACT

Le gène murin Adgrb1 code l’inhibiteur d’angiogenèse spécifique du cerveau 1 (BAI‑1), un GPCR d’adhérence enrichi dans le système nerveux et les microenvironnements associés au compartiment vasculaire. BAI‑1 participe aux interactions cellule–cellule et cellule–matrice, favorise la reconnaissance des cellules apoptotiques via une phagocytose dépendante de la phosphatidylsérine, et module le remodelage du cytosquelette par la signalisation des GTPases de la famille Rho. Un traitement protéolytique peut libérer des fragments anti‑angiogéniques, reliant BAI‑1 à la régulation de la croissance vasculaire et à l’homéostasie tissulaire. Des altérations de l’expression ou de la fonction de BAI‑1 ont été impliquées dans des voies pertinentes pour la neuroinflammation, l’organisation synaptique, la biologie du microenvironnement tumoral et l’angiogenèse aberrante, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des phénotypes du SNC et vasculaires.

BAI-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Adgrb1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BAI-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Adgrb1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Adgrb1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BAI-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Adgrb1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BAI-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BAI-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Adgrb1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.