Plásmido CRISPR de Activación (m) B7RP-1: sc-424469-ACT

El gen **Icosl** de ratón codifica el ligando coestimulador **B7RP-1 (ICOSL/CD275)**, un miembro de la superfamilia de las inmunoglobulinas expresado en células presentadoras de antígeno y en algunos compartimentos estromales no hematopoyéticos. La interacción de **ICOS** en células T activadas promueve una señalización dependiente de **PI3K** que favorece la diferenciación de las células T colaboradoras foliculares, las reacciones del centro germinal y la producción de anticuerpos con cambio de clase, vinculando a ICOSL con la regulación de la polarización de la inmunidad adaptativa. La comunicación mediada por ICOSL también influye en redes de citocinas que moldean el equilibrio **Th1/Th2/Th17** y el tráfico de células inmunitarias dentro de los tejidos linfoides. La señalización desregulada **ICOS–ICOSL** se estudia con frecuencia en modelos de autoinmunidad, inflamación crónica, alergia y modulación inmunitaria asociada a tumores, donde la coestimulación alterada puede modificar las respuestas inmunitarias humorales y celulares.

B7RP-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Icosl sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

B7RP-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Icosl en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Icosl, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de B7RP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Icosl y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de B7RP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía B7RP-1 en células tumorales con expresión de Icosl silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.