B7-H4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416865

Panoramica

VTCN1 codifica B7-H4 (V-set domain containing T cell activation inhibitor 1), un ligando checkpoint immunitario della famiglia B7 che sopprime la proliferazione dei linfociti T e la produzione di citochine, contribuendo alla regolazione immunitaria periferica. B7-H4 viene indotta in contesti mieloidi ed epiteliali e influenza la presentazione dell’antigene, la segnalazione infiammatoria e i programmi di evasione immunitaria all’interno del microambiente tumorale. Un’espressione disregolata di VTCN1 è stata riportata in diversi tumori solidi ed è associata a una ridotta attività immunitaria antitumorale, intersecandosi inoltre con vie che regolano la polarizzazione dei macrofagi e le soglie di attivazione dei linfociti T. Queste caratteristiche rendono VTCN1 un bersaglio utile per analizzare le reti di co-segnalazione inibitoria e i meccanismi immunoregolatori rilevanti per modelli di cancro e infiammazione cronica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO B7-H4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VTCN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VTCN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VTCN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina B7-H4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VTCN1 per lo studio della segnalazione di B7-H4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VTCN1 critici per la funzione di B7-H4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VTCN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal B7-H4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal B7-H4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VTCN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal B7-H4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR B7-H4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VTCN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VTCN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.