Plasmide CRISPR/Cas9 KO B7-H4 (h): sc-416865

Présentation

VTCN1 code pour B7-H4 (V-set domain containing T cell activation inhibitor 1), un ligand de point de contrôle immunitaire de la famille B7 qui supprime la prolifération des lymphocytes T et la production de cytokines, contribuant ainsi à la régulation immunitaire périphérique. B7-H4 est induite dans des contextes myéloïdes et épithéliaux et influence la présentation antigénique, la signalisation inflammatoire et les programmes d’échappement immunitaire au sein du microenvironnement tumoral. Une expression dérégulée de VTCN1 a été rapportée dans de nombreuses tumeurs solides et est associée à une diminution de l’activité immunitaire antitumorale, tout en s’inscrivant à l’interface de voies qui régissent la polarisation des macrophages et les seuils d’activation des lymphocytes T. Ces caractéristiques font de VTCN1 une cible utile pour disséquer les réseaux de co-signalisation inhibitrice et les mécanismes d’immunorégulation pertinents pour les modèles de cancer et d’inflammation chronique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO B7-H4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VTCN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VTCN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VTCN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine B7-H4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VTCN1 pour l'étude de la signalisation de B7-H4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VTCN1 essentiels à la fonction de B7-H4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VTCN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le B7-H4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le B7-H4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VTCN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le B7-H4 plasmide HDR (h) et le B7-H4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VTCN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VTCN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.