Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
B7-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419575
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- B7-2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico B7-2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: B7-2 Anticuerpo (D-6): sc-28347
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
B7-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419575 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Cd86 codifica el ligando coestimulador B7-2 (CD86), una glucoproteína transmembrana tipo I expresada en células presentadoras de antígeno como las células dendríticas, los macrófagos y los linfocitos B. B7-2 interactúa con CD28 y CTLA-4 en los linfocitos T para ajustar los umbrales de activación, la producción de citocinas y la tolerancia periférica, integrándose con la señalización del TCR, los programas transcripcionales de NF-κB/AP-1 y la regulación de los puntos de control inmunitarios. Su expresión inducible durante el reconocimiento innato conecta las señales inflamatorias con el cebado de la inmunidad adaptativa y las respuestas del centro germinal. La actividad desregulada de CD86 se ha implicado en modelos de autoinmunidad, inflamación crónica, respuestas al trasplante y evasión inmunitaria tumoral, lo que lo convierte en un nodo clave para la investigación en inmunología e inmuno-oncología.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO B7-2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cd86 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cd86 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cd86 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína B7-2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cd86 para la investigación de la señalización de B7-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Cd86 críticos para la función de B7-2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cd86 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido B7-2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido B7-2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cd86. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR B7-2 (m) y el plásmido HDR B7-2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cd86 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cd86 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.