Plasmide CRISPR/Cas9 KO B23/Nucleophosmin (m): sc-421943

Présentation

Le gène murin **Npm1** code B23/nucléophosmine, une phosphoprotéine nucléolaire multifonctionnelle qui navette entre le nucléole, le noyau et le cytoplasme afin de coordonner la biogenèse des ribosomes, la maturation de l’ARNr et l’architecture du nucléole. La nucléophosmine participe au contrôle du cycle cellulaire et aux réponses au stress via des interactions avec des réseaux régulateurs clés, notamment la signalisation p53/ARF, les réponses aux dommages de l’ADN et des processus associés à la chromatine. Ses rôles dans la duplication des centrosomes, la stabilité génomique et le transport nucléocytoplasmique relient la fonction de Npm1 au contrôle de la prolifération et au maintien de l’homéostasie cellulaire. Une activité et une localisation dérégulées de la nucléophosmine ont été largement étudiées en cancérologie et dans la régulation hématopoïétique, faisant de Npm1 une cible fréquente pour des études mécanistiques du stress oncogénique et du dysfonctionnement nucléolaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO B23/Nucleophosmin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Npm1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Npm1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Npm1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine B23/Nucleophosmin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Npm1 pour l'étude de la signalisation de B23/Nucleophosmin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Npm1 essentiels à la fonction de B23/Nucleophosmin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Npm1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le B23/Nucleophosmin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le B23/Nucleophosmin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Npm1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le B23/Nucleophosmin plasmide HDR (m) et le B23/Nucleophosmin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Npm1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Npm1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.