Partículas Lentivirales de Activación (h2) B-Myb: sc-401318-LAC-2

El gen humano MYBL2 codifica el factor de transcripción B-Myb, un regulador de la familia Myb que coordina la progresión del ciclo celular al controlar la expresión de genes necesarios para la transición G1/S, la replicación del ADN y la entrada en mitosis. B-Myb actúa dentro del eje regulador DREAM–MMB y coopera con la señalización impulsada por E2F y por ciclinas/CDK para modular programas de transcripción asociados a la cromatina y la estabilidad del genoma. La actividad desregulada de MYBL2 se vincula con frecuencia a fenotipos proliferativos y se ha asociado con firmas transcripcionales oncogénicas en múltiples contextos tumorales, lo que lo convierte en un nodo molecular útil para estudiar el control del ciclo celular y la reconfiguración transcripcional. La edición génica de MYBL2 permite la investigación mecanística de los puntos de control de la proliferación, las respuestas al estrés replicativo y el mapeo de dependencias de factores de transcripción en modelos celulares humanos.

Las partículas de activación lentiviral B-Myb (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MYBL2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral B-Myb (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MYBL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de B-Myb. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MYBL2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.