Plasmide CRISPR d'Activation (h) B-Myb: sc-401318-ACT

MYBL2 code pour le facteur de transcription humain B-Myb, un régulateur de la famille Myb nécessaire à la progression du cycle cellulaire et aux programmes d’expression génique prolifératifs. B-Myb favorise l’entrée en phase S et la progression de la mitose en coordonnant des réseaux transcriptionnels qui s’articulent avec l’activité des CDK, la signalisation dépendante d’E2F et les processus de réplication et de réparation de l’ADN. Une expression dérégulée de MYBL2 a été associée à l’instabilité génomique et à une altération du contrôle des points de contrôle, et elle est fréquemment liée à des phénotypes prolifératifs dans divers contextes pertinents pour le cancer. En tant que régulateur transcriptionnel nucléaire, B-Myb est couramment étudié pour son rôle dans l’expansion des lignages, les réponses au stress et le contrôle transcriptionnel des modules géniques de G2/M.

B-Myb Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYBL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

B-Myb Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYBL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYBL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de B-Myb. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYBL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de B-Myb au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie B-Myb dans les cellules tumorales présentant une expression de MYBL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.