Partículas Lentivirales de Activación (h2) B-ATF: sc-401553-LAC-2

El gen BATF humano codifica B-ATF, un factor de transcripción de cremallera de leucina básica de la red AP-1 que forma heterodímeros con proteínas JUN y modula la unión al ADN en elementos tipo AP-1 y en elementos compuestos AICE/IRF, para configurar programas de expresión génica específicos del contexto. BATF es un regulador central de la diferenciación y la función efectora de las células inmunitarias, e influye en la especificación de linajes de células T colaboradoras y T colaboradoras foliculares, en las respuestas del centro germinal y en la señalización inducida por citocinas aguas abajo de vías como la activación del TCR y el control transcripcional dependiente de IL-21/STAT. La actividad desregulada de BATF y los circuitos transcripcionales asociados se han vinculado con inflamación mediada por el sistema inmunitario, autoinmunidad y estados transcripcionales oncogénicos en neoplasias hematológicas, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la regulación inmunitaria. La edición génica de BATF respalda aplicaciones de genómica funcional, incluida la perturbación de la cooperatividad AP-1/IRF, el mapeo del uso de potenciadores y la remodelación de la cromatina, y el análisis de redes de señalización inmunitaria en modelos de células humanas diseñadas.

Las partículas de activación lentiviral B-ATF (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de BATF en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral B-ATF (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción BATF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de B-ATF. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo BATF y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.