Plásmido CRISPR de Activación (h) Axl: sc-400393-ACT

El AXL humano codifica Axl, una tirosina quinasa receptora de la familia TAM que se activa por ligandos como GAS6 para regular la supervivencia celular, la proliferación, la migración y la eliminación de células apoptóticas. La señalización de Axl activa nodos de las vías PI3K–AKT, MAPK/ERK y NF-κB, y contribuye a la transición epitelio-mesenquimal, la remodelación del citoesqueleto y la modulación de las respuestas inmunitarias innatas. La expresión o actividad desregulada de AXL se ha asociado con fenotipos tumorales invasivos, interacciones alteradas entre el estroma y el sistema inmunitario, y estados de señalización tipo resistencia en múltiples modelos de cáncer. Más allá de la oncología, el control mediado por Axl del tono inflamatorio y de los programas fagocíticos vincula a AXL con la fibrosis, la biología vascular y la regulación inmunitaria relevante para enfermedades infecciosas en sistemas experimentales.

Axl El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AXL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Axl El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AXL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AXL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Axl. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AXL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Axl en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Axl en células tumorales con expresión de AXL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.