Axin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401074-ACT

AXIN1 kodiert das humane Gerüstprotein Axin, eine zentrale Komponente des β-Catenin-Abbaukomplexes, der das kanonische Wnt-Signalnetzwerk durch koordinierte Interaktionen mit APC, GSK3β und CK1 moduliert. Indem Axin die Phosphorylierung von β-Catenin und dessen proteasomalen Abbau fördert, trägt es zur Regulation von Transkriptionsprogrammen bei, die Zellschicksalsfestlegung, Proliferation und Differenzierung steuern, und ist zudem an der Organisation des Zytoskeletts sowie an Stressantwort-Signalwegen beteiligt. Eine Störung von AXIN1 kann den Output des Wnt-Signalwegs verschieben und Entwicklungs- sowie Gewebehomöostase-Netzwerke verändern, was AXIN1 für Untersuchungen zur Umprogrammierung von Signalwegen in der Krebsbiologie und in anderen Kontexten aberranter Signalwegaktivierung relevant macht. AXIN1 wird daher häufig als mechanistischer Einstiegspunkt genutzt, um Wnt/β-Catenin-abhängige Transkription und Signalweg-Crosstalk in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

Axin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AXIN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Axin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AXIN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AXIN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Axin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AXIN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Axin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Axin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AXIN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.