Plasmide CRISPR/Cas9 KO AT1a (m): sc-419048
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- AT1a Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique AT1a, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO AT1a (m) | sc-419048 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Agtr1a code le récepteur murin de l’angiotensine II de type 1A (AT1a), un RCPG à sept domaines transmembranaires qui médie la signalisation de l’angiotensine II dans les tissus vasculaires, rénaux, cardiaques et neuronaux. Après liaison du ligand, AT1a se couple principalement à Gq/11 pour activer la phospholipase C, augmenter le Ca2+ intracellulaire et stimuler des voies de signalisation dépendantes de la PKC, tout en engageant également les cascades MAPK/ERK et des voies liées à la β-arrestine qui influencent des programmes transcriptionnels. Ce récepteur intègre les signaux du système rénine–angiotensine avec des processus cellulaires incluant la régulation du tonus vasomoteur, l’homéostasie du sodium et des fluides, les réponses au stress oxydatif et la signalisation inflammatoire. Une activité dérégulée de la voie AT1a est largement utilisée comme axe mécanistique dans des modèles d’hypertension, d’hypertrophie et de remodelage cardiaques, d’atteinte rénale et de dysfonction vasculaire, faisant d’Agtr1a une cible fréquente pour la dissection de voies dans la biologie cardiovasculaire et rénale.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AT1a (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Agtr1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Agtr1a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Agtr1a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AT1a.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Agtr1a pour l'étude de la signalisation de AT1a, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Agtr1a essentiels à la fonction de AT1a
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Agtr1a pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le AT1a plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le AT1a plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Agtr1a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le AT1a plasmide HDR (m) et le AT1a (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Agtr1a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Agtr1a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.