Plásmido Doble Nickase (h) ATP7A: sc-402387-NIC

ATP7A codifica una ATPasa tipo P transportadora de cobre que se localiza principalmente en la red trans-Golgi y se moviliza hacia la membrana plasmática para regular la distribución intracelular del cobre y su exportación. Al suministrar cobre a enzimas de la vía secretora y mantener la homeostasis del cobre, ATP7A favorece la maduración y la actividad de múltiples cuproenzimas implicadas en el control del estrés oxidativo, la biología del tejido conectivo y el neurodesarrollo. Su función se relaciona con el transporte de iones metálicos, el tráfico vesicular y vías sensibles al estado redox que moldean el metabolismo y la señalización celulares. La desregulación de ATP7A se asocia con trastornos hereditarios del transporte de cobre y con fenotipos más amplios compatibles con una función deficiente de las cuproenzimas.

ATP7A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP7A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP7A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP7A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP7A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.