Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (m) ATF4: sc-419228-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)ATF4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ATF4 (m) y el plásmido de doble nickasa ATF4 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Atf4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ATF4 Anticuerpo (B-3): sc-390063
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) ATF4 | sc-419228-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) ATF4 | sc-419228-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Atf4 de ratón codifica el factor de transcripción activador 4 (ATF4), un factor de transcripción bZIP que coordina programas de respuesta integrada al estrés que controlan el metabolismo de aminoácidos, el equilibrio redox y la proteostasis. ATF4 se induce aguas abajo de la fosforilación de eIF2α y se integra con la señalización de estrés del RE/UPR para regular genes implicados en la autofagia, la función mitocondrial y la remodelación transcripcional adaptativa. A través de estas vías, ATF4 modula decisiones de supervivencia celular bajo privación de nutrientes, estrés oxidativo e hipoxia, con amplia relevancia para la neurodegeneración, la disfunción metabólica, la inflamación y la biología tumoral. La alteración de la actividad de Atf4 también se ha vinculado a cambios en la diferenciación de osteoblastos y en la homeostasis esquelética, lo que respalda su uso en modelos de desarrollo y de estrés tisular.
ATF4 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Atf4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Atf4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Atf4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Atf4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.