Plasmide Double Nickase (m) ATF4: sc-419228-NIC

Le gène murin **Atf4** code le facteur de transcription activateur 4 (ATF4), un facteur de transcription de type bZIP qui coordonne des programmes de réponse intégrée au stress contrôlant le métabolisme des acides aminés, l’équilibre rédox et la protéostasie. ATF4 est induit en aval de la phosphorylation d’eIF2α et interagit avec la signalisation du stress du RE/UPR afin de réguler des gènes impliqués dans l’autophagie, la fonction mitochondriale et le remodelage transcriptionnel adaptatif. Par ces voies, ATF4 module les décisions de survie cellulaire en conditions de privation nutritive, de stress oxydatif et d’hypoxie, avec une pertinence large pour la neurodégénérescence, les dysfonctionnements métaboliques, l’inflammation et la biologie tumorale. La perturbation de l’activité d’Atf4 est également associée à des modifications de la différenciation des ostéoblastes et de l’homéostasie squelettique, ce qui étaye son utilisation dans des modèles de développement et de stress tissulaire.

ATF4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Atf4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Atf4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Atf4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Atf4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.