ATF-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416662-ACT

Humanes ATF2 kodiert den aktivierenden Transkriptionsfaktor 2 (ATF-2), einen bZIP-Transkriptionsfaktor, der durch stressresponsive Kinasen wie JNK und p38 MAPK aktiviert wird. Nach der Phosphorylierung reguliert ATF-2 induzierbare Genprogramme, die die Zellzyklusprogression, DNA-Schadensantworten, Entzündung und Apoptose steuern – häufig über Heterodimerisierung mit Mitgliedern der AP-1-Familie und durch Integration von MAPK-Signalen. Die ATF-2-Aktivität überschneidet sich mit der Chromatinregulation und der Immediate-Early-Transkription und beeinflusst kontextspezifische Programme in der Immun-Signalgebung sowie die zelluläre Anpassung an genotoxischen und oxidativen Stress. Eine dysregulierte ATF-2-Signalgebung wurde mit veränderten Proliferations- und Stressantwort-Phänotypen in unterschiedlichen Krebs- und Modellen entzündlicher Erkrankungen in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz als mechanistischer Knotenpunkt in Pathway-Studien unterstützt.

ATF-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ATF2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ATF-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ATF2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ATF2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ATF-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ATF2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ATF-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ATF-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ATF2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.