Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATAD1 (h): sc-413720

Présentation

ATAD1 (ATPase family AAA domain containing 1) est une ATPase AAA+ de la membrane externe mitochondriale qui participe au contrôle qualité des protéines en extrayant et en éliminant de la membrane les protéines à ancrage C-terminal (« tail-anchored ») mal localisées ou endommagées. Grâce à son activité de dislocase dépendante de l’ATP, ATAD1 contribue à l’homéostasie mitochondriale, coopère avec les voies ubiquitine–protéasome et influence les réponses au stress des organites, avec des répercussions sur le métabolisme cellulaire et la survie. Une perturbation de la surveillance des protéines membranaires dépendante d’ATAD1 peut modifier la dynamique mitochondriale et la protéostasie, des processus souvent étudiés dans le contexte de la neurodégénérescence, du dérèglement métabolique et du remodelage mitochondrial associé au cancer. En tant que régulateur du renouvellement des protéines mitochondriales, ATAD1 constitue un point d’entrée utile pour étudier l’articulation entre le contrôle qualité des organites, la signalisation de l’apoptose et l’adaptation cellulaire au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ATAD1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ATAD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ATAD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ATAD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ATAD1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ATAD1 pour l'étude de la signalisation de ATAD1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ATAD1 essentiels à la fonction de ATAD1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ATAD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ATAD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ATAD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ATAD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ATAD1 plasmide HDR (h) et le ATAD1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ATAD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ATAD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.