Plásmido Doble Nickase (h) ASS1: sc-401923-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ASS1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ASS1 (h) y el plásmido de doble nickasa ASS1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ASS1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ASS1 Anticuerpo (E-12): sc-365475
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ASS1 | sc-401923-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ASS1 | sc-401923-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La ASS1 humana (argininosuccinato sintasa 1) cataliza la condensación dependiente de ATP de citrulina y aspartato para formar argininosuccinato, un paso central del ciclo de la urea que permite la desintoxicación del amoníaco y contribuye a la homeostasis sistémica del nitrógeno. Más allá de la ureagénesis hepática, la actividad de ASS1 influye en la disponibilidad intracelular de arginina, vinculando el flujo del ciclo de la urea con la biosíntesis de óxido nítrico y con un metabolismo más amplio de los aminoácidos. La expresión o función alteradas de ASS1 se asocian con trastornos del ciclo de la urea como la citrulinemia tipo I y se han observado en contextos tumorales en los que se investigan la auxotrofía de arginina y la reprogramación metabólica. Estas características hacen de ASS1 un nodo útil para estudiar el manejo del nitrógeno, el acoplamiento metabólico mitocondria–citosol y las respuestas al estrés por limitación de aminoácidos.
ASS1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ASS1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ASS1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ASS1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ASS1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.