Particules Lentivirales d'Activation (h) ASPP1: sc-404330-LAC

PPP1R13B code pour l’« apoptosis-stimulating of p53 protein 1 » (ASPP1), un régulateur de la transcription induite par le stress qui renforce le programme transcriptionnel pro-apoptotique de TP53 et des membres apparentés de sa famille. ASPP1 participe à la réponse aux dommages de l’ADN, au contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire et à l’apoptose en modulant des sorties transcriptionnelles dépendantes des promoteurs, reliant ainsi la signalisation associée à la chromatine aux décisions de destinée cellulaire. Une expression altérée de PPP1R13B ou une activité dérégulée de l’axe ASPP1–p53 a été associée à la tumorigenèse et à la résistance au stress génotoxique dans plusieurs contextes cancéreux, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la signalisation oncogénique, de la stabilité du génome et des seuils apoptotiques. Ces fonctions font d’ASPP1 un nœud utile pour disséquer la manière dont des co-régulateurs transcriptionnels ajustent l’activité de la voie p53 selon les types cellulaires.

Les particules d'activation lentivirales ASPP1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PPP1R13B dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ASPP1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PPP1R13B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ASPP1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PPP1R13B ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.