Plasmide Double Nickase (m) ASK 1: sc-424043-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ASK 1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ASK 1 Double Nickase (m) et le plasmide ASK 1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Map3k5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ASK 1 Antibody (H-2): sc-390275
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) ASK 1 | sc-424043-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) ASK 1 | sc-424043-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La protéine murine Map3k5 code l’Apoptosis signal-regulating kinase 1 (ASK1), une MAP3K qui relie le stress oxydatif, le stress du réticulum endoplasmique et les signaux inflammatoires à l’activation en aval des voies JNK et p38 MAPK. ASK1 est activée par sa dissociation de régulateurs redox tels que la thiorédoxine, ainsi que par des signaux médiés par les TRAF, ce qui favorise des cascades de phosphorylation influençant l’apoptose, la production de cytokines et l’adaptation cellulaire au stress. Par ces voies, ASK1 contribue à façonner les réponses immunitaires innées et les décisions de destin cellulaire induites par le stress dans divers tissus. Une signalisation ASK1 dérégulée a été associée à une inflammation pathologique et à des processus de lésion tissulaire, ce qui en fait une cible fréquente dans les études mécanistiques des réseaux de signalisation du stress.
ASK 1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Map3k5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Map3k5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Map3k5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Map3k5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.