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ASC/TMS1/PYCARD双切口酶质粒(m) | sc-426209-NIC | 20 µg | $410.00 |
Pycard 编码 ASC(亦称 TMS1/PYCARD),是一种适配蛋白,在炎性小体组装过程中将胞质模式识别传感器与 caspase-1 的激活连接起来。ASC 促进超分子 ASC 斑点(ASC specks)的形成,并支持 IL-1β 和 IL-18 的成熟,从而把先天免疫识别与细胞焦亡及炎症信号传导联系起来。在小鼠体系中,Pycard 依赖的通路与 NF-κB 预激、NLRP3/AIM2 炎性小体以及应激反应相交汇,共同塑造髓系细胞的激活与组织炎症。ASC 信号失调与炎症性及自身免疫表型有关,并常在感染、神经炎症、代谢性炎症以及肿瘤相关免疫等模型中被研究。
ASC/TMS1/PYCARD 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Pycard 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Pycard内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Pycard的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Pycard基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。