Plasmide Double Nickase (h) ASC/TMS1/PYCARD: sc-400151-NIC

PYCARD, également connu sous le nom d'ASC/TMS1, code une protéine adaptatrice qui amorce l'assemblage de l'inflammasome en reliant des protéines capteurs telles que NLRP3 et AIM2 à CASP1 via ses domaines PYD et CARD. Cette fonction d'échafaudage permet l'activation de la caspase-1 induite par proximité, entraînant le clivage de la pro-IL-1β et de la pro-IL-18 ainsi que l'induction d'une mort cellulaire pyroptotique via la gasdermine D, plaçant ASC au centre des voies de signalisation de l'immunité innée et des réponses au stress. Dans les cellules humaines, PYCARD participe à la reconnaissance des agents pathogènes, à l'inflammation stérile et aux voies de mort cellulaire qui façonnent les réponses immunitaires des macrophages et des cellules épithéliales. Une signalisation PYCARD/ASC dérégulée est impliquée dans les maladies inflammatoires chroniques, la neuroinflammation, les maladies métaboliques et l'inflammation associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible fréquente d'études mécanistiques sur la maturation des cytokines et la dynamique des inflammasomes.

ASC/TMS1/PYCARD Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PYCARD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PYCARD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PYCARD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PYCARD.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.