Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARP-1 (h): sc-405241

Présentation

NR2F2 code le récepteur nucléaire orphelin humain ARP-1 (également appelé COUP-TFII), un facteur de transcription indépendant des ligands qui se fixe à l’ADN sous forme de mono- ou d’hétérodimère afin de réguler des programmes géniques du développement et du métabolisme. ARP-1 intègre des signaux qui orientent les décisions de destin cellulaire, les processus d’angiogenèse et de lymphangiogenèse, ainsi que l’organogenèse, via le contrôle transcriptionnel de réseaux liés au dialogue entre récepteurs nucléaires et à l’activité des enhancers. Dans les tissus adultes, NR2F2 influence la biologie du muscle lisse vasculaire et de l’endothélium, l’adipogenèse, et l’homéostasie mitochondriale/métabolique, avec des effets dépendants du contexte sur la prolifération et la différenciation. Une expression ou une activité dérégulée de NR2F2 a été associée à la biologie des cancers, à des malformations cardiovasculaires congénitales et à des troubles métaboliques, ce qui en fait une cible fréquemment utilisée pour des études mécanistiques de la régulation transcriptionnelle et de la spécification des lignages.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ARP-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NR2F2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NR2F2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NR2F2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ARP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NR2F2 pour l'étude de la signalisation de ARP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NR2F2 essentiels à la fonction de ARP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NR2F2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ARP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ARP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NR2F2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ARP-1 plasmide HDR (h) et le ARP-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NR2F2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NR2F2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.