Plásmido Doble Nickase (h) Arnt 1: sc-401039-NIC

ARNT (translocador nuclear del receptor de hidrocarburos arílicos; HIF‑1β) codifica un factor de transcripción básico hélice‑bucle‑hélice PAS que actúa como socio de dimerización obligado de AHR y de los factores inducibles por hipoxia, incluidos HIF‑1α y HIF‑2α. A través de estos complejos, Arnt 1 integra la detección de xenobióticos con la señalización de oxígeno y metabólica para regular programas transcripcionales que controlan enzimas de desintoxicación, angiogénesis, metabolismo glucolítico, adaptación mitocondrial y decisiones sobre el destino celular. La regulación génica dependiente de ARNT contribuye a las respuestas celulares a la hipoxia y a ligandos ambientales, con relevancia para la inflamación, la biología de barrera y la adaptación del microambiente tumoral. La actividad desregulada de las vías AHR/HIF implica a ARNT en contextos como la carcinogénesis, mecanismos de enfermedad metabólica y fenotipos inmunitarios o vasculares alterados, lo que lo convierte en un nodo clave para el análisis de estas vías.

Arnt 1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARNT en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARNT. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARNT. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARNT alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.