Plasmide Double Nickase (h) Arnt 1: sc-401039-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Arnt 1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Arnt 1 Double Nickase (h) et le plasmide Arnt 1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ARNT. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Arnt 1 Antibody (A-3): sc-17811
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Arnt 1 | sc-401039-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Arnt 1 | sc-401039-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARNT (translocateur nucléaire du récepteur des hydrocarbures aromatiques ; HIF-1β) code un facteur de transcription bHLH-PAS (basic helix–loop–helix PAS) qui agit comme partenaire de dimérisation obligatoire de l’AHR et des facteurs induits par l’hypoxie, notamment HIF-1α et HIF-2α. Au travers de ces complexes, Arnt 1 intègre la détection des xénobiotiques aux signaux liés à l’oxygène et au métabolisme afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant les enzymes de détoxification, l’angiogenèse, le métabolisme glycolytique, l’adaptation mitochondriale et les décisions de destinée cellulaire. La régulation génique dépendante d’ARNT contribue aux réponses cellulaires à l’hypoxie et aux ligands environnementaux, avec des implications pour l’inflammation, la biologie des barrières et l’adaptation du microenvironnement tumoral. Une activité dérégulée des voies AHR/HIF implique ARNT dans des contextes tels que la carcinogenèse, les mécanismes des maladies métaboliques et des phénotypes immunitaires ou vasculaires altérés, en faisant un nœud clé pour l’analyse des voies de signalisation.
Arnt 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARNT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARNT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARNT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARNT.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.