ARK-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423197

概要

Aurkb（ARK-2）はセリン／スレオニンキナーゼをコードしており、染色体パッセンジャー複合体（chromosome passenger complex）の触媒コアとして機能し、染色体凝縮、キネトコア－微小管結合の誤り修正、ならびに細胞質分裂を協調的に制御します。ARK-2の活性は、有糸分裂を通じてリン酸化依存的なシグナル伝達と、セントロメアから紡錘体中央部（spindle midzone）への空間的な再局在化によって調節され、紡錘体形成チェックポイントの解除を正確な染色体分配と結び付けています。Aurkbの機能破綻はクロマチン動態や収縮環形成を乱し、異数性や微小核を引き起こします。これらの過程はゲノム不安定性の研究でしばしば利用されます。AURKBシグナルの変調は増殖性表現型や腫瘍関連の染色体不安定性に関与するとされ、細胞周期および有糸分裂の忠実性研究における共通の重要ノードとなっています。

ARK-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAurkb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Aurkb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aurkbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ARK-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ARK-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Aurkb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ARK-2の機能に不可欠なAurkbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Aurkbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ARK-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびARK-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Aurkb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ARK-2 HDRプラスミド（m）および ARK-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAurkbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAurkb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。