Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARG1/Arginase 1 (bovine): sc-437305

Présentation

ARG1/Arginase 1 code une uréohydrolase manganèse-dépendante qui catalyse la conversion de la L-arginine en urée et ornithine, agissant comme enzyme terminale clé du cycle de l’urée et comme régulateur de l’élimination de l’azote. En contrôlant la biodisponibilité de l’arginine, ARG1 influence la biosynthèse des polyamines et de la proline via l’ornithine, relie le métabolisme des acides aminés à la production de collagène et module la signalisation de l’oxyde nitrique en entrant en compétition avec les NO-synthases. Dans les systèmes bovins, l’activité d’ARG1 est pertinente pour l’homéostasie métabolique hépatique et pour les programmes immunométaboliques des cellules myéloïdes, où le catabolisme de l’arginine peut façonner le tonus inflammatoire et le remodelage tissulaire. Une déplétion de l’arginine due à une arginase dérégulée a été associée à une altération des fonctions effectrices immunitaires et à des réponses modifiées au stress métabolique, ce qui soutient des études mécanistiques dans des modèles hépatiques et immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ARG1/Arginase 1 (bovine) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires bovine. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ARG1/Arginase 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de ARG1/Arginase 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de ARG1/Arginase 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ARG1/Arginase 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (bovine) et le ARG1/Arginase 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (bovine2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ARG1/Arginase 1 plasmide HDR (bovine) et le ARG1/Arginase 1 (bovine2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.