Arg CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417779-ACT

ABL2 kodiert Arg, eine nicht-rezeptorische Tyrosinkinase der Abl-Familie, die Signale von Wachstumsfaktorrezeptoren und Adhäsionskomplexen integriert, um den Umbau des Aktin-Zytoskeletts, die Zellmigration und das Neuritenauswachsen zu regulieren. Arg ist an der phosphorylierungsabhängigen Kontrolle der Dynamik fokaler Adhäsionen sowie an Rho-GTPase-gekoppelten Signalwegen beteiligt, die Zellmorphologie und Motilität prägen. Über seine Funktionen in der Zytoskelettorganisation und Signaltransduktion wird eine fehlregulierte ABL2-Aktivität oder -Expression in Zusammenhängen wie onkogenem Signaling, invasionsassoziierten Phänotypen und aberranter Aktivierung von Kinase-Netzwerken untersucht. Humanes Arg stellt daher einen nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Crosstalk zwischen kinasegetriebenen Signalwegen und zytoskelettabhängigen Zellverhaltensweisen dar.

Arg Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ABL2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Arg Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ABL2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ABL2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Arg-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ABL2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Arg-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Arg-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ABL2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.