ARF6 Double Nickase Plasmid (h): sc-400799-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ARF6 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ARF6 Double-Nickase-Plasmid (h) und ARF6 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ARF6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ARF6: sc-7971
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ARF6 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400799-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARF6 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400799-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADP-Ribosylierungsfaktor 6 (ARF6) ist eine kleine GTPase, die Membrantransport, den Umbau des Aktin-Zytoskeletts und die Phosphoinositid-Signalübertragung an der Plasmamembran sowie in endosomalen Kompartimenten reguliert. Durch den Wechsel zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen koordiniert ARF6 clathrinunabhängige Endozytose, das Recycling von Membranproteinen sowie integrinabhängige Zelladhäsion und -migration und ist dabei mit Signalwegen verknüpft, die die Dynamik von PI(4,5)P₂ und GTPasen der Rho-Familie einbeziehen. Der ARF6-abhängige Vesikeltransport beeinflusst die Internalisierung von Rezeptoren und die nachgeschaltete Signalstärke und prägt damit Prozesse wie Zellpolarität und Zytokinese. Eine fehlregulierte ARF6-Aktivität wurde in der Krebsbiologie mit verändertem invasivem Verhalten und metastatischen Signalprogrammen in Verbindung gebracht; zudem ist ARF6 an Mechanismen des Wirts–Pathogen-Eintritts sowie an neuroentwicklungsbezogenen Prozessen beteiligt, die für Krankheitsmodelle relevant sind.
ARF6 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ARF6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ARF6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ARF6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ARF6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.