Plásmido Doble Nickase (h) ARF3: sc-402706-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ARF3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ARF3 (h) y el plásmido de doble nickasa ARF3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ARF3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ARF3 Anticuerpo (41): sc-135841
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ARF3 | sc-402706-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ARF3 | sc-402706-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El factor de ADP-ribosilación 3 (ARF3) es una pequeña GTPasa de la familia ARF que regula el tráfico vesicular al controlar el reclutamiento de proteínas de cubierta, la curvatura de la membrana y el metabolismo de fosfolípidos en el Golgi y el sistema endosomal. El ciclo entre los estados unidos a GDP y a GTP vincula a ARF3 con el transporte secretor y endocítico, incluido el tráfico retrógrado mediado por COPI y la coordinación de la clasificación de carga. A través de sus funciones en la dinámica de membranas y la señalización en membranas intracelulares, ARF3 influye en procesos como el reciclaje de receptores, la secreción de proteínas y la organización del citoesqueleto. La desregulación de la señalización de la familia ARF y de las vías de tráfico se ha asociado con cambios en la migración celular, la proliferación y las respuestas al estrés, lo que convierte a ARF3 en un objetivo útil para estudios mecanísticos de fenotipos relacionados con el tráfico en modelos relevantes para enfermedades.
ARF3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARF3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARF3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARF3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARF3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.