Arc CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400231-ACT

ARC kodiert das aktivitätsregulierte, zytoskelettassoziierte Protein (Arc), ein Produkt eines Immediate-Early-Gens, das neuronale Aktivität mit synaptischem Umbau koppelt. Arc reguliert die Endozytose von AMPA-Rezeptoren, die Dynamik des Aktin-Zytoskeletts und die lokale Translation an dendritischen Dornen (Spines) und formt dadurch synaptische Plastizität, Lernen und Gedächtnis. Über diese Funktionen steht es in Verbindung mit aktivitätsabhängigen Signalwegen und Programmen des homeostatischen synaptischen Scalings, die die exzitatorische Neurotransmission feinabstimmen. Eine dysregulierte ARC-Expression oder ein Arc-abhängiger Transport wurde in neuropsychiatrischen und neurodegenerativen Forschungskontexten mit untersucht, darunter Studien zu kognitiven Funktionsstörungen, Anfallsanfälligkeit und veränderter Synapsendichte.

Arc Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ARC-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Arc Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ARC-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ARC-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Arc-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ARC-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Arc-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Arc-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ARC-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.