Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ARA70 Double Nickaseプラスミド (m): sc-424185-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ARA70 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ARA70ダブルニカースプラスミド（m）およびARA70ダブルニカースプラスミド（m2）は、Ncoa4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ARA70 抗体 (C-4): sc-373739
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ARA70 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-424185-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスNcoa4はARA70をコードしており、ARA70は核内受容体コアクチベーターとして、アンドロゲン受容体および関連する核内受容体複合体と相互作用することで、リガンド依存的な転写を調節します。ARA70は、細胞増殖・分化・代謝を制御するクロマチン関連の転写プログラムに影響し、ステロイドホルモン経路と共役因子（コレギュレーター）経路にまたがるシグナルを統合します。さらにNCOA4は、NCOA4により誘導されるオートファジー機構と協調してフェリチンをリソソームへ輸送することで、フェリチノファジーを介した鉄恒常性にも関与し、核内受容体生物学とオートファジーおよび酸化ストレス応答とを結び付けています。これらの過程の破綻は、ホルモンシグナル伝達の変調、鉄依存的な細胞脆弱性の変化、ならびにがん生物学や神経変性研究の文脈で重要な表現型と関連づけられています。
ARA70 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Ncoa4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Ncoa4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Ncoa4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Ncoa4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。